Identification de la prednisone et de la méthylprednisolone dans les cheveux par HPLC-ES-MS

Identification of prednisone and methylprednisolone in human hair by HPLC-ES-MS

¹ Institut de Médecine Légale, 11, rue Humann - F-67085 STRASBOURG France
² Laboratoire de Biochimie - BP 24 - F-76083 LE HAVRE France

Reçu : 15 Juin 2000
Accepté : 5 Septembre 2000

Résumé

Cet article décrit une méthode de dosage de la prednisone et de la méthylprednisolone par chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse par une interface de type electrospray. Les cheveux ont été prélevés chez 11 patients sous corticothérapie après avoir obtenu leur consentement oral. Dans la majorité des cas, ce traitement faisait suite à une greffe. Les cheveux ont été préalablement lavés par deux bains successifs de dichlorométhane et réduits en poudre dans un broyeur à boulet. La solubilisation des composés a été réalisée par incubation de 100 mg de poudre de cheveux dans du tampon Soerensen ( 16h à 40° C) en présence de 50 ng de cortisol-d₃ utilisé en temps qu'étalon interne. La purification a été réalisée sur cartouches lsolute C18 suivie d'une extraction liquide-liquide par de l'éther à pH alcalin. La phase organique finale a été évaporée puis l'extrait sec repris dans 30 μl de methanol. La séparation chromatographique des composés a été réalisée sur une colonne Novapack C18 à l'aide d'un gradient d'acétonitrile de 20 à 60 % en 4 min. Le détecteur utilisé était un spectromètre de masse Perkin Elmer Sciex API 100. La réponse du détecteur était linéaire pour des concentrations de prednisone et de méthylprednisolone variant de 20 à 2000 pg/mg. Les rendements d'extraction pour des cheveux surchargés en corticostéroïdes à la concentration finale de 250 pg/mg étaient de 70 % pour la prednisone et 75 % pour la méthylprednisolone. A cette même concentration, la répétabilité intra-jour était de 8 % pour la prednisone et 12 % pour la méthylprednisolone. Les limites de détection, déterminées pour un rapport signal/bruit de fond équivalent à 2, étaient de 15 pg/mg pour la prednisone et 10 pg/mg pour la méthylprednisolone. Lors de cette étude, la prednisone a pu être identifiée dans les cheveux de 9 patients sur 10 traités par Cortancyl^® (30 à 130 pg/mg, moyenne 65 pg/mg). La méthylprednisolone a pu être dosée (15 pg/mg) dans les cheveux de l'unique patient traité par Médrol^®.

Abstract

This paper describes a screening procedure based upon high-performance liquid chromatography / electrospray / mass spectrometry for the identification and quantification of prednisone and méthylprednisolone in human hair. Hair specimens were obtained from 11 patients under corticosteroids treatment after verbal consent. Hair strands were washed in methylene chloride, pulverized in a ball mill and 100 mg of the powdered hair were incubated in 1 ml Soerensen buffer, pH 7.6 for 16 h at 40 °C, in presence of 50 ng cortisol-d₃ used as internal standard. Purification of the incubation medium was achieved on SPE C18 Isolute extraction columns followed by an alkaline liquid-liquid extraction with diethylether. The eluate was evaporated to dryness and resuspended in 30 µl of methanol. The chromatography was operated on a Novapak C18 column using a linear gradient of acetonitrile from 20 to 60 % in 4 min. The detector was a Perkin Elmer Sciex API 100 mass spectrometer. The detector response was linear for prednisone and méthylprednisolone concentrations ranging from 20 to 2000 pg/mg. Extraction recovery at 250 pg/mg was 70 % for prednisone and 75 % for méthylprednisolone. Repeatability (CV values) at 250 pg/mg were 8 and 12 % for prednisone and methylprednisolone, respectively. The limits of detection, calculated for a signal to noise ratio of 2, were 15 and 10 pg/mg for prednisone and methylprednisolone, respectively. In the presented study, prednisone was identified in the hair of 9/10 patients treated by Cortancyl^® (30 à 130 pg/mg, mean 65 pg/mg). Methylprednisolone was detected (15 pg/mg) in the hair specimen obtained from the unique patient treated with Medrol^®.