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A new HPLC method for the determination of tocopherol in rat plasma

Une nouvelle méthode de dosage du tocophérol dans le plasma de rat par chromatographie liquide à haute performance

¹ Laboratoire de Chimie Analytique et Environnement (05/UR/12-03), Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 Jarzouna, Tunisia
² Laboratoire de Physiologie Intégrée, Faculté des Sciences de Bizerte, 7021 Jarzouna, Tunisia

^⋆ Correspondence: Soumaya Ghodbane, ghodhbanes@yahoo.fr

Received: 24 February 2013
Accepted: 3 April 2013

Abstract

Objective: The objective of the present work is the simplification of sample treatment for vitamin E measurements in rat plasma by high-performance liquid chromatography (HPLC), then the evaluation of the effect of cadmium treatment on the vitamin E level. Methods: A HPLC method to determine vitamin E was developed with direct extraction with n-hexane-dichloromethane. The dry residue was redissolved in methanol. The method employs a Supelco Discovery^® C18 column and methanol/water (95:5, v/v) as the mobile phase. After being developed, the method was validated with a fluorescence detector. To examine the effects of exogenous cadmium on the plasma vitamin E concentrations, male Wistar rats (weighing 150 ± 20 g) were exposed for 48 h and 10 days to oral intake of 15 and 30 mg/L cadmium (as CdCl₂) and vitamin E (10 mg/Kg of diet) simultaneously. Results: This method makes sample treatment easier, especially when working with a large number of samples. It has proved to be selective, linear, accurate and precise. Intoxication with cadmium was followed by a significant decrease in plasma vitamin E concentrations. The lowest level was obtained in the 30 mg/L dosing group after 10 days of cadmium administration. Conclusion: We describe a rapid reversed-phase (RP) HPLC procedure for the determination of vitamin E in plasma. This method might be useful in routine assessment because it saves on solvents and chromatographic time. Interestingly, α-tocopherol may play an important role in preventing oxidative stress induced by cadmium exposure by scavenging free radicals.

Résumé

Objectif : L’objectif du présent travail est la simplification du traitement de l’échantillon pour le dosage de la vitamine E par chromatographie en phase liquide à haute performance (CLHP) dans le plasma, puis, l’évaluation de l’effet du traitement au cadmium sur les concentrations de la vitamine E. Méthodes : Nous proposons dans ce travail de mettre au point et de valider une nouvelle méthode de dosage par CLHP de la vitamine E dans le plasma. Après extraction liquide-liquide (n-hexane-dichlorométhane), la séparation est faite par CLHP avec détection à fluorescence en utilisant une colonne Supelco^® C18 et une phase mobile composée de méthanol et d’eau (95:5, v/v). Pour examiner les effets de l’exposition au cadmium sur les concentrations plasmatiques de la vitamine E, des rats (150 ± 20 g) ont été exposés pendant 48 h et 10 jours à une prise orale de cadmium (CdCl₂, 15 et 30 mg/L) et de vitamine E (10 mg/kg d’aliment) simultanément. Résultats : Cette méthode rend le traitement des échantillons plus facile, en particulier lorsqu’on travaille avec un grand nombre d’échantillons. Il s’est avéré être simple, sensible et rapide pouvant être appliqué en routine. L’intoxication au cadmium a été suivie d’une diminution significative des concentrations de vitamine E, le taux le plus bas a été obtenu après 10 jours d’exposition à la dose de 30 mg/L de cadmium. Conclusion : Nous avons développé une méthode CLHP qui présente de nombreux avantages : une préparation des échantillons de durée relativement courte, simple et surtout peu coûteuse, ce qui rend cette méthode prometteuse pour des dosages routiniers de la vitamine E plasmatique. Fait intéressant, l’α-tocophérol peut jouer un rôle important dans la prévention du stress oxydatif induit suite à l’exposition au cadmium en piégeant les radicaux libres.