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Intoxication non létale par la Méthoxétamine : confirmation analytique à l’aide d’un système d’extraction en ligne Turboflow® couplé à de la LC/MS/MS

A non fatal intoxication with Methoxetamine: analytical confirmation with a Turboflow® on-line extraction coupled with LC/MS/MS

¹ Laboratoire de Pharmacologie – Toxicologie, AP-HP, Hôpital Raymond Poincaré, 104 boulevard Raymond Poincaré, 92380 Garches, France
² Département de Médecine Légale et d’Anatomo-Pathologie, AP-HP, Centre Hospitalier Universitaire Raymond Poincaré, Université de Versailles Saint-Quentin-en-Yvelines, UFR Médecine PIFO, 104 boulevard Raymond Poincaré, 92380 Garches, France

^⋆ Correspondance : Jean-Claude Alvarez, jean-claude.alvarez@rpc.aphp.fr

Reçu : 27 Octobre 2012
Accepté : 5 Février 2013

Résumé

Objectif : Entièrement automatisable et couplé à la spectrométrie de masse, l’extraction en ligne est un outil alliant rapidité et sensibilité. Le but de cette étude a été de développer une méthode de dosage dans le plasma d’un analogue structural de la kétamine, la méthoxétamine (MXE), par LC/MS/MS précédée d’une extraction en ligne utilisant le système Turboflow®. Méthodes : 100 μL de plasma sont ajoutés au même volume d’une solution de travail de kétamine-d4 dans l’acétonitrile utilisé comme étalon interne (EI). Après centrifugation, 20 μL du surnageant sont injectés sur une colonne d’extraction C18 XL (50 × 0,5-mm). Les analytes retenus sont transférés de la colonne d’extraction vers une colonne analytique Hypersil GOLD (50 × 3-mm; diamètre des particules : 3 μm) puis élués grâce à un gradient de phase mobile tampon formiate/acétonitrile. La MXE et l’EI sont ionisés grâce à une source électrospray en mode positif. Les ions parents [M + H]⁺ sont m/z 248,1 pour la MXE et m/z 242,1 pour l’EI. L’ion fils le plus abondant après fragmentation est utilisé pour la quantification, soit m/z 203,1 pour la MXE et 224,1 pour l’EI. Résultats : La justesse est comprise entre 96,8 % et 108,8 % et les CV intra- et inter-jour  <8,8 % sur l’ensemble de la gamme de calibration de 2,0 ng/mL (LOQ) jusqu’à 1000,0 ng/mL. Aucun effet matrice n’a été observé. Conclusion : Le système Turboflow® couplé à la LC/MS/MS permet une quantification rapide de composés comme la MXE dans le plasma sans extraction préalable et sans effet matrice. Cette méthode a permis avec succès la confirmation analytique d’une intoxication aiguë à la MXE, montrant chez le patient une concentration plasmatique de 136,0 ng/mL.

Abstract

Introduction: Fully automated, and coupled with a mass spectrometric detection, on-line extraction is a very powerful and less time consuming tool than the classical extraction techniques. The objective of this study was to develop an on-line automated sample preparation using a Turboflow® device coupled to a LC/MS/MS for measurement of methoxetamine (MXE) in human plasma. Methods: Samples (100 μL) were vortex mixed with internal standard solution (ketamine-d4 in acetonitrile). After centrifugation, 20 μL of the supernatant were injected onto a 50 × 0.5-mm C18XL column. The retained analytes were then back-flushed onto a 50 × 3-mm (3 μm) Hypersil GOLD analytical column, then eluted with formate buffer/actonitrile gradient. MXE and IS were ionized by electrospray in positive mode. Parent [M + H]⁺ ions were m/z 248.1 for MXE and m/z 242.1 for IS. The most intense product ion of MXE (m/z 203.1) and IS (m/z 224.1) were used for quantification. Results: The assay was accurate ([96.8% – 108.8%] range) and precise (intra- and inter-day coefficient of variation  < 8.8%) over the range of 2.0 (LOQ) to 1000.0 ng/mL (upper limit of quantification). No matrix effect was observed. Conclusion: Turboflow® device coupled with LC/MS/MS allows rapid determination of compounds like MXE in plasma without extraction and without matrix effect. This method has been successfully applied to one case report after acute intoxication, showing a plasma concentration of 136 ng/mL.