Article original

Mise au point et validation d’une méthode de dosage simultané de la morphine et de ses métabolites glucuronoconjugués totaux par chromatographie liquide d’interactions hydrophiles

Development and validation of a simultaneous determination method of morphine and total morphine glucuronides by hydrophilic interaction liquid chromatography

¹ Institut de Recherche Criminelle de la Gendarmerie Nationale, 1 boulevard Théophile Sueur, 93111 Rosny-sous-Bois, France
² Service de Médecine Légale, Faculté de Médecine, 27 boulevard Jean Moulin, 13385 Marseille, France

^* Correspondance : Yannick Lecompte, lecompte.yann@free.fr

Reçu : 5 Octobre 2009
Accepté : 26 Février 2010

Résumé

Objectif: Dans le cadre d’une étude expérimentale de redistribution post-mortem des xénobiotiques menée chez le lapin, une méthode de dosage simultané de la morphine et de ses métabolites glucuronoconjugués totaux dans des échantillons de sang total de faible volume a été développée. Méthode: Les étalons internes deutérés sont ajoutés à une prise d’essai de 100 μL. La préparation des échantillons consiste en l’extraction liquide-solide sur des cartouches Oasis^® HLB (Waters^®, Saint-Quentin-en-Yvelines, France). L’analyse est menée par chromatographie liquide haute performance couplée à la spectrométrie de masse en mode d’ionisation électrospray. Les composés d’intérêt sont élués par chromatographie liquide d’interactions hydrophiles au travers d’une colonne Luna^® HILIC – 150 mm × 2,0 mm × 3 μm (Phenomenex^®, Le Pecq, France). La méthode de dosage est validée selon le concept de l’erreur totale à l’aide du logiciel e-noval^® (Chemcad, Obernai, France). Résultats: Les fonctions de réponse sont de type quadratique non pondéré. Les résultats sont linéaires sur l’ensemble de l’intervalle de dosage des analytes soit de 10 à 300 ng/mL pour la morphine et de 750 à 10000 ng/mL pour ses métabolites glucuronoconjugués totaux. La limite de détection estimée est de 3,5 ng/mL pour la morphine et de 250 ng/mL pour ses métabolites glucuronoconjugués totaux. Les incertitudes de mesure sont respectivement de 15 % et de 9 %. Conclusion: L’extraction liquide-solide sur cartouches Oasis^® HLB et la chromatographie liquide d’interactions hydrophiles, adaptées à la séparation des molécules polaires, ont permis de mettre au point une méthode de dosage simultané de la morphine et de ses métabolites glucuronoconjugués totaux sur de faibles volumes d’échantillons.

Abstract

Aim: As part of an experimental post-mortem drugs’ redistribution study in rabbits, a method for simultaneous determination of morphine and total morphine glucuronides in small volume whole blood samples was developed. Method: The deuterated internal standards are added to a sample of 100 μL. Sample preparation is performed by solid-phase extraction on Oasis^® HLB cartridges (Waters^®, Saint-Quentin-en-Yvelines, France). The analysis is carried out by high performance liquid chromatography – electrospray ionization mass spectrometry. The separation of analytes is obtained by hydrophilic interaction liquid chromatography with a Luna^® HILIC column – 150 mm × 2.0 mm × 3 μm (Phenomenex^®, Le Pecq, France). Analytical method is validated according to the total error approach with e-noval^® software (Chemcad, Obernai, France). Results: Response functions are unweighted quadratic regressions. Analytical method is linear in measuring intervals: from 10 to 300 ng/mL for morphine and 750 to 10000 ng/mL for total morphine glucuronides. The estimated detection limit is 3.5 ng/mL for morphine and 250 ng/mL for total morphine glucuronides. Measurement uncertainties are respectively 15% and 9%. Conclusion: The solid-phase extraction on Oasis^® HLB cartridges and hydrophilic interaction liquid chromatography allowed to develop a method for simultaneous determination of morphine and total morphine glucuronides.