Criblage de 4 classes de stupéfiants dans la salive par LC-MS/MS

Screening for illicit drugs in oral fluid by LC-MS/MS

Laboratoire ChemTox, 3, rue Grüninger, 67400 Illkirch, France

Auteur de correspondance : pascal.kintz@wanadoo.fr

Reçu : 28 Février 2007
Accepté : 9 Juillet 2007

Résumé

La sécurité routière est aujourd'hui une des préoccupations majeures des pouvoirs publics. Selon les statistiques et la présence croissante de stupéfiants chez les accidentés de la route de moins de 30 ans, les autorités ont décidé qu'un dépistage rapide de ces substances au bord des routes était nécessaire. Mais deux problèmes se posent. Les techniques déjà mises au point ne permettent pas une détection des 4 classes de stupéfiants à la fois (cannabis, opiacés, cocaïne, amphétamines). De plus, les matrices actuellement utilisées ne sont pas adaptées au contrôle routier (prélèvement invasif, atteignant l'intimité de la personne, nécessitant un médecin). C'est pour ces raisons que la salive a été envisagée comme matrice alternative. Le but de ce travail a été de mettre au point une technique qui analyse, dans la salive, les 4 classes de stupéfiants à la fois. Pour faciliter le recueil de salive, des systèmes de prélèvement ont été développés. Nous avons choisi d'utiliser le système Intercept, système reconnu par les autorités américaines. Sur le plan analytique, le dosage par chromatographie liquide parait être la méthode la plus satisfaisante. Un millilitre du mélange liquide du système Intercept®/Salive est extrait par extraction liquide/liquide puis analysé en LC-MS/MS. La séparation se fait sur une colonne XTerra C18 avec une élution en mode gradient avec comme solvant : acétonitrile, tampon formiate à pH 3. Trois étalons internes sont utilisés pour permettre la quantification des échantillons : morphine-d3, MDMA-d5, et THC-d3. Les essais de linéarité et répétabilité donnent des résultats satisfaisants. Les coefficients de corrélation varient entre 0,9860 pour le cocaéthylène et 0,9997 pour la cocaïne. Les résultats des tests de répétabilité sont tous inférieurs à 20%, variant de 2,9% pour la 6-MAM à 19,4% pour le cocaéthy-lène. Les limites de quantification, inférieures aux seuils fixés par la SAMSHA, sont de 1 ng/mL pour toutes les molécules, sauf pour le THC (2ng/mL) et l'amphétamine (5ng/mL). Enfin, une série d'échantillons recueillis lors d'un contrôle routier à la sortie d'une discothèque a été analysée par la technique mise au point.

Abstract

Driving under the influence of drugs constitutes an authentic health problem. There are more and more young subjects, less than 30 year old which have road accidents while under the influence of drugs of abuse. Due to sampling difficulties or too large window of detection, common specimens such as blood, urine or hair do not fit to the requested situation of driving context. Oral fluid is an alternative biological matrix for drug testing that has several advantages: collection is rapid, non-invasive, and relatively easy to obtain. At this time, there is a lack of a simultaneous screening procedure which is suitable for cannabis, opiates (including heroin), cocaine and amphetamines (including ecstasy). The objective of our work was to develop a single analysis method for the 4 classes of usual drugs. Analysis by tandem mass spectrometry of this specimen seems to be both simple and highly specific and therefore we have based our study using this approach. Small oral fluid samples were collected from volunteers using an Intercept collection device. Samples were prepared by liquid-liquid extraction and analysed by LC-MS/MS. LC-separation was achieved using a XTerra MS C18 column, eluted with a gradient of acetonitrile and formate buffer at pH 3. Three internal standards were used to quantify the drugs: morphine-d3, MDMA-d5, and THC-d3. The developed method was adequately validated. Good linearity was obtained for all the drugs. Within-day relative coefficients of variation (CV) varied from 2,9% for 6-MAM to 19,4% for cocaethylene. The limits of quantification were 1 ng/mL for all drugs, except for THC (2 ng/mL) and amphetamine (5 ng/mL). A series of samples collected of a road control was analyzed by this new method.