Numéro |
Ann Toxicol Anal
Volume 18, Numéro 3, 2006
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Page(s) | 197 - 205 | |
DOI | https://doi.org/10.1051/ata:2006011 | |
Publié en ligne | 6 décembre 2007 |
Recherche et dosage de sulfamides hypoglycémiants dans le plasma humain par CLHPSM/SM à trappe d'ions : validation et application au dépistage des hypoglycémies factices
Identification and quantification of sulfony lureas in human plasma by LC-ESI-MS/MS : validation of the method and application to the diagnosis of factitious hypoglycemia
1
Laboratoire de Pharmacologie et Toxicologie, Hôpital Maison-Blanche,
CHU de Reims, France
2
Fédération Médico-Judiciaire du CHU de Reims, France
3
Centre Régional de Pharmacovigilance, CHU de Reims, France
Auteur de correspondance : ghoizey@chu-reims.fr
Reçu :
23
Mai
2006
Accepté :
17
Juillet
2006
Devant un tableau clinique d'hypoglycémie inexpliquée, il est essentiel de rechercher la possibilité d'une intoxication par les sulfamides hypoglycémiants. A ce jour, le diagnostic définitif ne peut souvent se faire que par l'identification de ces molécules dans le sang. Nous proposons une méthode par CLHP-SM/SM à trappe d'ions permettant d'identifier et de quantifier 6 sulfamides hypoglycémiants (glibenclamide, glibornuride, glicazide, glimepiride, glipizide, carbutamide) dans le plasma humain. Après extraction en phase liquide de l'échantillon (500 L) par l'éther en milieu acide, en utilisant le glisoxepide comme étalon interne, la séparation chromatographique s'effectue en 8 min, sur colonne Hypurity
(C18, 5
m, 150 x 2,1mm .i.d.) à l'aide du mélange acétonitrile/acide formique 0,1%, 50/50 v/v délivré en mode isocratique. La détection est assurée par un détecteur SM/SM à trappe d'ions en mode d'ionisation électrospray positif. L'identification de la ou des molécule(s) incriminée(s) est réalisée par comparaison des spectres obtenus en mode “ scan complet SM/SM ” avec les spectres de références enregistrés dans une bibliothèque spectrale réalisée au labo-ratoire. La détermination des concentrations plasmatiques est effectuée au moyen de gammes étalons préparées dans les mêmes conditions. La méthode a été validée pour des domaines de linéarité, variables selon la molécule (r2 > 0,99). Le défaut de justesse et la fidélité déterminés pour chaque molécule et à différentes concentrations sont inférieurs à 15%, excepté aux limites de quantification de certains composés au niveau desquelles ces valeurs peuvent atteindre 18%. Les coefficients d'extraction obtenus dans le plasma sont compris entre 63% et 87%, sauf pour le carbu-tamide (< 45%). L'effet de suppression d'ions ne survient pas aux temps de rétention des composés d'intérêt. Cette métho-de, rapide et spécifique, est bien adaptée à l'identification et la quantification dans le plasma de sulfamides hypoglycé-miants, dans un contexte d'hypoglycémie "factices".
Abstract
Identification of sulfonylureas in blood may be essential in the evaluation of hypoglycaemic crisis of unknown origin. The aim of the present study was to develop a highly selective liquid chromatography-electrospray tandem mass spectrometric (LC-ESI-MS/MS) method using an ion trap detector for rapid screening, identification, and quantification of sulfonylureas in human plasma. After a standard liquid-liquid extraction with glisoxepide as an internal standard, six sulfonylureas (glibenclamide, glipizide, gliclazide, gli-bornuride, glimepiride, carbutamide) were eluted over a C18 column within 8 min with a mobile phase delivered isocrati-cally. Drugs were identified and quantified in full scan MS-MS mode using a home-made MS-MS library. No ion sup-pression effect was noted for the analytes at their specific retention-time windows. For all drugs, assay validation sho-wed good linearity (r2 > 0.99), acceptable imprecision and recovery for commonly used criteria of acceptance (.i.e. < 15% except at the limit of quantification of some com-pounds where 20% was acceptable). The mean extraction recoveries of five sulfonylureas were 63% to 87%, but < 45% for one (carbutamide). Nevertheless, the high sensitivity of the MS-instrument made it possible to allow detection and quantification of all six drugs from subtherapeutic to toxic concentrations with good precision. The present assay method allows an accurate and rapid identification and quantification of sulfonylureas in human plasma that can be used for the specific diagnosis of factitious hypoglycaemia caused by ingestion of these drugs.
Mots clés : Sulfamides hypoglycémiants / CLHP-SM/SM à trappe d'ions / hypoglycémie "factice".
Key words: Sulfonylureas / LC-MS/MS ion-trap / factitious hypoglycemia.
© Société Française de Toxicologie Analytique, 2006