Dosage de la buprenorphine et de la norbuprénorphine dans les cheveux par GC-MS

Determination of buprenorphine and norbuprenorphine in hair by GC-MS

Department of Legal Medicine & Public Health, Unerversity of Pavia, Via Forlanini 12-27100 PAVIA - Italy

Auteur de correspondance : stramesi@unipv.it

Reçu : 7 Novembre 2005
Accepté : 17 Décembre 2005

Résumé

La buprenorphine est un dérivé synthétique de la thébaïne utilisée comme produit de substitution de l'héroïne dans les programmes de désintoxication. La buprenorphine a été présentée pour cette application en Italie en mai 2000 et son utilisation pour cette thérapeutique a augmenté de plus de 30% dans les 3 dernières années. Le but de cette étude a été d'étendre la méthode appliquée en routine dans notre laboratoire à la détection des metabolites de l'héroïne, de la cocaïne et des amphétamines ainsi qu'à la buprenorphine (BPR) et son metabolite la norbuprenorphine (norBPR) afin de suryeiller l'administration de BPR dans les programmes de désintoxication et de détecter une éventuelle toxicomanie pendant la désintoxication. La procédure analytique est la suivante : après une étape de lavage dans le methanol, les cheveux ont étéfinement coupés et incubés dans du HCl 0,1N (45°C, pendant la nuit). La nalorphine a été choisie comme standard interne. La purification des stupéfiants a été faite par une extraction en phase solide (Bond Elut Certify) qui a un taux de récupération supérieur à 80% pour la BPR et la norBPR ; l'extrait purifié a été dérivé par le N-méthyl, Ntriméthylsilyl trifluoroacétamide (MSTFA) et l'analyse a été conduite sur une GC-MS en mode SIM. Les ions suivis étaient : m/z 450, 482, 506 pour la BPR, m/z 468, 500, 524 pour la norBPR et m/z 455. 414, 324 pour le standard interne (les ions soulignés ont été utilisés comme quantificateurs). La validation de la méthode a été réalisée par : l'évaluation de l'exactitude et de la précision ; l'analyse de sept échantillons de cheveux sains ; le test de linéarité (0-0,5 ng/mg, n = 5). Les précisions intra-jour (n-7) et inter-jour (n = 3 sur 5 jours différents) étaient supérieures à 8,8% pour les deux stupéfiants et l'exactitude supérieure à 15%. La limite de détection était de 0,005 ng/mg et la limite de quantification de 0,01 ng/mg. Cette méthode a été appliquée sur des échantillons de cheveux prélevés sur des patients ayant pris part à des programmes de désintoxication. Elle a prouvé sa facilité d'application en routine.

Abstract

Buprenorphine is a synthetic derivative of thebaine used as a substitute of heroin in detoxification programs. Buprenorphine was introduced for this application in May 2000 in Italy and its use for this therapeutic purpose has increased by over than 30% in three years. The aim of this study was to extend the method routinely applied in our laboratory to detect heroin metabolites, cocaine and amphetamines also to buprenorphine (BPR) and its metabolite norbuprenorphine (norBPR) in order to monitor BPR administration in detoxification programs as well as to detect drug abuse during detoxification. The analytical procedure was as follows: after a washing-step with methanol, hair was finely cut and incubated in HCl 0.1N (45°C, overnight). Nalorphine was chosen as internal standard. Purification of analytes was executed by solid phase extraction (Bond Elut Certify) which provided recoveries higher than 80% for both BPR and norBPR; purified extract was derivatised with N-methyl, N-trimethylsilyl trifluoroacétamide (MSTFA) and the analysis was performed by GC-MS in SIM mode. Ions monitored were: m/z 450, 482, 506 for BPR, m/z 468, 500, 524 for norBPR and m/z 455. 414, 324 for internal standard (underlined ions were used as quantifiers). Method validation was performed by: evaluation of accuracy and precision; analysis of seven drug-free hair samples; testing of linearity (0-0.5 ng/mg, n = 5). Intra-day (n = 7) and inter-day (n = 3 on 5 different days) precision were better than 8.8%for both analytes and accuracy better than 15%. The limit of detection was 0.005 ng/mg and the limit of quantitation was 0.01 ng/mg. This method was applied to hair samples collected from patients in withdrawal treatment programmes and demonstrated its good applicability in routine analysis.