A rapid and sensitive liquid chromatography-tandem mass spectrometry method for the determination of amphetamine and related designer drugs in urine

Une méthode par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem rapide et sensible pour le dosage de l'amphétamine et de drogues de synthèse dans les urines

¹ Department Clinical Chemistry and Toxicology, Ghent University Hospital - Belgium
² Department of Clinical Biology, Microbiology and Immunology, Faculty of Medicine, Ghent University - Belgium

Corresponding author: alain.verstraete@ugent.be

Received: 10 January 2005
Accepted: 7 April 2005

Abstract

A method for the direct analysis of six amphetamine compounds in urine was developed using liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS). We added 90 μl of a solution of internal standards (1 pg/mL of d₅-AMP, d₅-MET, d₅-MDA, d₅-MDMA, d₅-MDEA and d₅-MBDB) to 10 μl of urine followed, by vortex-mixing and centrifugation. The sample solutions were analyzed by LC-MS/MS in the MRM mode after separation on a reversed-phase C18 column using gradient elution. Separation and detection of all compounds was accomplished within eight minutes. Linearity was established for all compounds, from 78 to 100000 ng/mL. Correlation coefficients for all analytes exceeded 0.998. The lower limit of quantification was 10 ng/mLfor all compounds, except for AMP and MDA (78 ng/mL). Withinday imprecision (CV%) and between-day CVs (78, 625 and 10000 ng/mL) rangedfrom 2.62 to 16.26% andfrom 0.86 to 11.98%, respectively. Accuracy (bias%) lay between 0.16 and 7.17 %. The peak areas of the amphetamines added to urine fell in the range 85-115% compared to standard solutions in methanol/water; except for AMP and MDA. Carryover was negligible and stability after storage at room temperature for up to 24h was acceptable. In conclusion, the presented method allows the accurate, precise and rapid determination of six amphetamine compounds in urine over a wide analytical range.

Résumé

Une méthode pour l'analyse directe de six amphétaminiques dans les urines a été développée en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/MS). Nous avons ajouté 90 μl d'un mélange d'étalons internes (1 pg/mL de d₅-AMP, de d₅-MET, de d₅-MDA, de d₅MDMA, de d₅-MDEA et de d₅-MBDB) à 10 μl d'urine, mélangé par vortex et centrifugé. Les échantillons ont été analysés par LC-MS/MS en mode MRM après séparation sur une colonne Cl 8 à phase inverse en utilisant un gradient d'élution. La séparation et la détection de tous les composés ont été accomplies en huit minutes. La linéarité a été établie pour tous les composés, de 78 à 100000 ng/mL. Les coefficients de corrélation étaient supérieurs à 0.998. Les limites de quantification étaient inférieures à 10 ng/mL, saufpour l'amphétamine et la MDA (78 ng/mL). La répétabilité (CV%) et la reproductibilité variaient respectivement entre 2.62 et 16.26% et entre 0.86 et 11.98%. En ce qui concerne l'exactitude, le pourcentage de biais à 78 et 10000 ng/mL variait entre 0.16 et 7.17 %. La surface des pics des amphétamines ajoutées à de l'urine variait entre 85 et 100% de celle des amphétamines dissous dans un mélange d'eau et de methanol, excepté pour l'amphétamine et le MDA. Le carry-over était négligeable eï la stabilité (156 et 5000 ng/mL) après stockage à la température ambiante pendant 24h était acceptable. En conclusion, la méthode présentée permet la détermination exacte, précise et rapide de six amphétaminiques dans les urines sur une plage de concentration large.