Soumission chimique. Recherche des benzodiazepines et hypnotiques dans les cheveux par LC-MS/MS

Testing for benzodiazepines and hypnotics in hair by LC-MS/MS with a special focus on drug-facilitated crimes

Laboratoire ChemTox, 3, rue Gruninger - 67400 ILLKIRCH - FRANCE

Auteur de correspondance : pkintz@labochemtox.com

Reçu : 10 Janvier 2005
Accepté : 2 Avril 2005

Résumé

La preuve biologique d'un acte délictueux ou criminel est une des bases de l'expertise judiciaire. Dans le cadre de la soumission chimique, l'analyse des cheveux peut se montrer déterminante. Nous présentons ici une méthode de criblage de 16 benzodiazepines et hypnotiques (alprazolam, 7-aminoclonazépam, 7-aminofiunitrazépam, bromazépam, clobazam, diazepam, lorazépam, lormetazépam, midazolam, nordiazépam, oxazepam, temazépam, tetrazépam, triazolam, zaleplon et Zolpidem) dans les cheveux et poils en utilisant la chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem. Cette procédure comporte une étape de décontamination par le dichlorométhane, une segmentation des cheveux (segments de 2 ou 3 cm) suivi d'un découpage plus fin de chaque segment (1-2 mm), une incubation dans un tampon phosphate (pH 8,4) en présence de 1 ng de diazepam-d.5 utilisé comme étalon interne, une extraction de type liquide/liquide par du dichlorométhane / ether diéthylique (90/10), une séparation sur colonne XTerra Cl 8 et une détection par spectrométrie de masse en tandem en utilisant 2 transitions par composé. A partir d'une masse de 20 mg de cheveux, les limites de quantification (LOQ) sont de l'ordre de 0,5 à 5 pg/mg. La linéarité a été vérifiée pour chaque composé depuis la LOQ jusqu'à 200 pg/mg. Les coefficients de variation, mesurés en 6 points et à 2 concentrations (10 et 50 pg/mg) ont variés de 5 à 20% pour toutes les molécules sauf pour le 7-aminoclonazépam. Aux mêmes concentrations, les rendements d'extraction étaient compris entre 32 et 76 %. Ces résultats démontrent que la méthode est efficace pour identifier 16 benzodiazepines et hypnotiques et pour les quantifier à très faibles concentrations, devenant ainsi un outil de choix pour démontrer une exposition unique.

Abstract

A procedure is presentedfor the screening of 16 benzodiazepines and hypnotics in human hair by LC-MS/MS (alprazolam, 7-aminoclonazepam, 7-aminoflunitrazepam, bromazépam, clobazam, diazepam, lorazépam, lormetazépam, midazolam, nordiazepam, oxazepam, temazepam, tetrazepam, triazolam, zaleplon and Zolpidem). The method involves decontamination of hair with methylene chloride, segmentation, hair cut into small pieces, incubation of 20 mg in phosphate buffer (pH 8.4) in the presence of 1 ng diazepam-d5 used as internal standard, liquid-liquid extraction with methylene chloride/diethyl ether (90/10) and separation using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. The limits of quantification for all benzodiazepines and hypnotics rangefrom 0.5 to 5 pg/mg using a 20-mg hair sample. Linearity is observedfrom the limit of quantification of each compound to 200 pg/mg (r² > 0.99). Coefficients of variation measured on 6 points and at 2 concentrations (10 and 50 pg/mg) range from 5 to 20 % for all drugs but one. Extraction recovety, measured at the 2 same concentrations range from 32 to 76 %. These results werefound suitable to screenfor 16 benzodiazepines in hair and detect them at veiy low concentrations, making this method suitable to monitor single dose.