Dosage simultané de huit glycols dans les milieux biologiques par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse

Determination of eight glycols in biological specimens by gas chromatography-mass spectrometry

Laboratoire de Pharmacocinétique et de Toxicologie Cliniques, Groupe Hospitalier, BP 24, 76083 Le Havre Cedex

Reçu : 10 Octobre 2001
Accepté : 26 Novembre 2001

Résumé

L'objectif de ce travail est de proposer une technique de dosage des glycols dans les milieux biologiques, par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse : éthylène glycol = EG ; diéthylène glycol = DEG ; 1,3-propanediol = 1,3-PD ; 1,2-propanediol = 1,2-PD ; 1,2- butanediol = 1,2-BD ; 2,3-butanediol = 2,3-BD ; triéthylène glycol = TEG ; hexylène glycol = HXG. Le dosage est effectué par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse à l'aide d'un injecteur de type split-splitless et d'une colonne classique de type DB5MS. La prise d'essai est constituée par 20 µl d'échantillon biologique préalablement dilué au dixième. Après déprotéinisation de l'échantillon par l'acétonitrile, les glycols sont silylés en mono ou di dérivés TMS. La séparation chromatographique des dérivés obtenus est suffisante, elle permet la quantification simultanée des 8 glycols. Les acquisitions sont réalisées en mode courant ionique total de 40 à 500 uma. Le gamma-hydroxybutyrate d₆ (GHB-d₆) est utilisé comme étalon interne. Après extraction d'un ion de quantification et de deux ions de confirmation, la limite de détection et la limite de quantification s'échelonnent respectivement de 0,7 mg/l pour l'EG à 8,5 mg/l pour le TEG et de 1,3 mg/l pour l'EG à 18,2 mg/l pour le 1,2-PD. Dans le sérum et le sang, une réponse linéaire est obtenue entre 1 à 18 selon le glycol et 800 mg/l. Pour une concentration de 400 mg/l, la répétabilité et la reproductibilité (n = 8 et 10) varient respectivement de 1,9 % pour le TEG à 4,9 % pour le 1,2-PD (11,8 % pour l'HXG), et de 3,5 % pour le DEG à 9,0 % pour le 2,3-BD (20,4 % pour l'HXG). La méthode a été appliquée avec succès au plasma et au sang total. Cette technique complète utilement la méthode de dosage enzymatique de l'EG. Elle permet, outre la confirmation spécifique de la présence d'EG, de quantifier simultanément sept autres glycols.

Abstract

A simple extraction and derivatization procedure for the analysis of eight glycols (ethylene glycol = EG ; diethylene glycol = DEG ; 1,3-propanediol = 1,3-PD ; 1,2-propanediol = 1,2-PD ; 1,2-butanediol = 1,2-BD ; 2,3-butanediol = 2,3-BD ; triethylene glycol = TEG ; hexylene glycol = HXG) using a 20 µl ten fold dilution serum or blood sample is described. Following deproteinisation with acetonitrile, derivatization to its mono, di or tri TMS derivative, the glycols were detected using gas chromatography-electron impact mass spectrometry equipped with a split-splitless inlet and a DB-5MS column in the scan mode from 40 to 500 uma. Gamma-hydroxybuturate d₆ (GHB-d₆) was used as the internal standard. With one quantitation ion and two confirmation ions, the limit of detection and the limit of quantitation serum ranged respectively from 0,7 mg/l for EG to 8,5 mg/l for TEG and from 1,3 mg/l for EG to 18,2 mg/l for 1,2-PD. A linear response was observed over the concentration range from 1-18 to 800 mg/l for serum and blood. Coefficients of variation for both intra-assay precision and interassay reproducibility ranged respectively between 1,9 % for TEG to 4,9 % for 1,2-PD (11,8 % for HXG) and 3,5 % for DEG to 9,0 % for 2,3-BD (20,4 % for HXG) at the 400 mg/l serum level. The method was applied to plasma and whole blood.