Développement d'une méthode de dépistage toxicologique large par HPLC/DAD : comparaison de trois méthodes d'extraction du sérum, extraction liquide-liquide et extractions solide-liquide (Bond Elut Certify^® et OASIS^® MCX)

Development of a method of large toxicological screening by HPLC/DAD : comparaison of three methods of serum extraction, liquid-liquid extraction and solid-liquid extractions (Bond Elut Certify^® and OASIS^® MCX)

Laboratoire de Pharmacotoxicologie et Analyses de Traces, Hôpital Édouard Herriot, place d'Arsonval - LYON

Reçu : 5 Janvier 2001
Accepté : 2 Mars 2001

Résumé

Les auteurs proposent une méthode de dépistage toxicologique large de xénobiotiques médicamenteux dans le sérum faisant appel à une étape préanalytique nécessaire à une séparation par chromatographie liquide haute performance (HPLC) et une détection UV à barrettes de diode. Cette méthode permet la détection et la quantification de nombreuses molécules de polarité variée. Trois types d'extraction sont comparées : extraction liquide-liquide, extraction solide-liquide sur colonne de silice (BOND ELUT CERTIFY^®) et extraction solide-liquide sur colonne de copolymère (OASIS^® MCX), afin d'évaluer la meilleure technique pour l'objectif recherché. L'analyse chromatographique est réalisée sur HPLC/DAD, HP 1100 équipé d'une colonne hypersil BDS C18, 3X125 mm. La phase mobile est un tampon phosphate 0,1 M pH 5,6. L'extraction sur colonne OASIS^® MCX donne, en moyenne, pour l'ensemble des molécules analysées, les rendements d'extraction les plus importants avec une bonne répétabilité. Seuls les anti-inflammatoires non stéroïdiens sont mal extraits par cette technique mais leurs concentrations thérapeutiques étant importantes, leur détection est possible. Outre ses bons rendements, la colonne OASIS^® MCX permet une extraction plus rapide, une moindre utilisation de solvant et de sérum que les autres techniques. Cette colonne est donc bien adaptée aux dépistages toxicologiques larges à partir de sérum.

Abstract

The authors propose a broad screening method of toxic molecules in blood comprising a serum extraction, a high phase liquid chromatographic separation (HPLC) and an UV diode array detection. This method estimates the quantity of different molecular compounds of varied polarity. Three extractions methods were compared : liquid-liquid extraction, solid-phase extraction on silica columns (BOND ELUT CERTIFY^®) and solid-phase extraction on copolymer toxicolumns (OASIS^® MCX). The chromatographic analysis was carried out on a HPLC/DAD HP1100 analyser with a hypersil BDS column C18 3X125 mm and the mobile phase was phosphate buffer 0,1 M pH 5,6. The column OASIS^® MCX generally gave the best results and was the most reliable. However, the non steroïdal antiinflammatory drugs were poorly extracted with this column but as their therapeutic concentrations are high, their detection was still possible. In addition to its good resolution, the column OASIS^® MCX allows a faster extraction, and uses less solvent and serum than the other techniques. This column is thus well adapted to broad toxicological screening starting from serum.