Numéro |
Ann Toxicol Anal
Volume 13, Numéro 1, 2001
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Page(s) | 41 - 48 | |
DOI | https://doi.org/10.1051/ata/2002027 | |
Publié en ligne | 8 avril 2009 |
Adaptation d'une méthode colorimétrique à la mesure automatisée de l'activité catalytique des cholinestérases dans un plasma et dans un hémolysat de sang total
Adaptation of a colorimetric method for automated measurement of cholinesterase activity in plasma and whole blood hemolysate
1
Laboratoire de Biochimie, Toxicologie et Pharmacologie Cliniques, H.I.A. Clermont-Tonnerre, rue Colonel
Fonferrier - BP 41 - 29240 BREST Naval
2
Service de Médecine de Prévention, D.C.N. - 29240 BREST Naval
Reçu :
18
Octobre
2000
Accepté :
20
Décembre
2000
La mesure de l'activité des cholinestérases dans le plasma permet le diagnostic d'une intoxication aiguë ou chronique par un inhibiteur des chlolinestérases. D'après la littérature, l'activité intra-érythrocytaire est un marqueur pertinent dans les intoxications chroniques et constitue un meilleur indicateur des effets biologiques des inhibiteurs des cholinestérases que l'activité plasmatique. Les auteurs proposent une adaptation de la méthode colorimétrique manuelle en mode biréactif Cholinesterase MPR2 Roche. La technique proposée permet la mesure automatisée à 37 °C de l'activité des cholinestérases dans un plasma ou dans un hémolysat de sang total sur analyseur multiparamétrique Cobas® Mira ABX Diagnostics ; l'activité intra-érythrocytaire est obtenue par calcul à partir des deux activités précédentes et de l'hématocrite. La technique est linéaire entre 19 et 959 U/L. Trente sérums et trente hémolysats de sang total ont été analysés avec la technique proposée et avec une méthode de référence en mode mono-réactif : Cholinesterase [PTC] Sigma Diagnostics. La comparaison des résultats rend compte d'un facteur de corrélation égal à 0,99 pour les échantillons plasmatiques et à 0,91 pour les hémolysats de sang total. L'automatisation réduit les imprécisions liées à l'utilisation de petits volumes de prise d'essai (4 µl) et de réactif déclenchant (28 µl). Elle permet de rendre un résultat dans un délai de cinq minutes après traitement des échantillons biologiques. L'emploi d'un bi-réactif est économiquement rentable particulièrement pour l'analyse ponctuelle de petites séries d'échantillons biologiques : les réactifs sont stables pendant six semaines à + 4 °C et à l'abri de la lumière après reconstitution.
Abstract
The measurement of plasma cholinesterase activity is used to diagnose acute or chronic poisoning with cholinesterase inhibitors. According to the literature, the erythrocyte cholinesterase activity is a better biomarker for chronic cholinesterase inhibitor poisoning than plasma cholinesterase activity. The authors propose an adaptation of the colorimetric method in bi-reagent form Cholinesterase MPR2 Roche. The proposed technique allows automated measurement at 37 °C of the cholinesterase activity in plasma or hemolysate of whole blood on a Cobas® Mira ABX Diagnostics chemistry system ; erythrocyte cholinesterase activity is obtained by calculation from the previous two activities and from the hematocrit value. The technique is linear between 19 and 959 U/L. Thirty sera and thirty hemolysates of whole blood were analysed with the proposed technique and with a reference method in mono-reagent form : Cholinesterase [PTC] Sigma Diagnostics. The comparison of results yields a correlation coefficient of 0,99 for plasma and 0,91 for whole blood hemolysate. The automation reduces imprecision due to manipulation of small sample volume (4 µl) and start-reagent (28 µl). The proposed technique allows to obtain a result in five minutes after treatment of the samples. The use ofbi-reagent is economical particularly for the analysis of a small series of samples : after reconstruction, the reagent solutions are stable during six weeks at +4 °C if shielded from the light.
Mots clés : acetylcholinestérase intraérythrocytaire / carbamates / intoxication / méthode colorimétrique / organophosphorés / pesticides
Key words: carbamates / colorimetric method / erythrocyte acetylcholinesterase / organophosphates / pesticides / poisoning
© Société Française de Toxicologie Analytique, 2001