Revue générale

Préparation d’échantillons pour analyses en immunochimie

Sample preparation for immunoassay analysis in toxicology

Centre Hospitalier Universitaire, Service de toxicologie et pharmacocinétique, BP 577, 86021 Poitiers Cedex, France

^* Correspondance : Bertrand Brunet, Tél. 05 49 44 41 14, Fax 05 49 44 49 55, bertrand.brunet@chu-poitiers.fr

Reçu : 17 Février 2010
Accepté : 2 Avril 2010

Résumé

Introduction : Malgré l’essor des techniques chromatographiques couplées à la spectrométrie de masse, l’immunoanalyse revêt toujours une importance capitale dans les laboratoires hospitaliers et de médecine légale. Nous nous attacherons ici à décrire quels pourraient être les protocoles à mettre en œuvre pour utiliser ces tests immunochimiques sur des matrices non conventionnelles (sang total laqué, cheveux…) et sur les préparations nécessaires pour analyser ces échantillons. Méthodes : Différentes techniques immunochimiques avec leur aptitude à accepter des matrices dites alternatives seront évoquées. Une application utilisant une défécation du sang total avec de l’acétone est proposée. Quatre paramètres importants en toxicologie (paracétamol, phénobarbital, digoxine et valproate de sodium) ont été testés sur plasma et sur sang total avec cette technique. Les corrélations entre les résultats obtenus sont présentées. Un point particulier est fait sur la préparation d’échantillons en vue de l’analyse de matrices alternatives (cheveux, humeur vitrée, salive…) avec des méthodes immunochimiques. Résultats : La procédure présentée ici pour l’analyse du paracétamol, du phénobarbital, de la digoxine et du valproate de sodium dans le sang total par méthode CEDIA donne de bons résultats avec des corrélations satisfaisantes entre les valeurs obtenues sur plasma le jour du prélèvement et les valeurs obtenues sur sang total quelques semaines après. Conclusion : Les avantages des tests immunochimiques sont bien connus; ils peuvent être automatisables, permettent une grande cadence et un résultat rapide. Leur utilisation en toxicologie médico-légale reste compliquée par la nature des échantillons disponibles. S’ils peuvent être utiles dans un but de screening, une confirmation par méthode chromatographique reste indispensable.

Abstract

Introduction: Despite the breakthrough of chromatographic techniques coupled to mass spectrometry, immunoanalysis is still a key component of the various techniques used in clinical or forensic toxicology. This article describes different procedures to use immunoassays on unconventional biological matrices such as clotted blood or hair specimens. A focus is made on sample preparation needed to analyse such matrices. Methods: Various immunoassay techniques and their ability to accept unconventional matrices are discussed. An application using protein precipitation with acetone is proposed for the analysis of four relevant compounds in toxicology: valproic acid, acetaminophen, digoxin and phenobarbital. Correlations between results obtained on plasma and whole blood after several weeks of storage are presented. A focus is made on sample preparation for hair specimens, vitreous humor and saliva before analysis with immunoassay tests. Results: The procedure presented for the analysis of valproic acid, acetaminophen, digoxin and phenobarbital with CEDIA reagents gives satisfactory results in whole blood. Good correlations are obtained between whole blood and plasma for the same samples. Conclusion: Advantages of immunoassay testing are well known, it is a high capacity, rapidity and possibility of automation. The use of immunoassays in forensic toxicology is complicated by the nature and the quality of the samples available. These immunochemical methods can serve as screening techniques but confirmation of positive results is always recommended.