Dosage par chromatographie liquide haute performance de la luméfantrine sur spot de sang séché

Liquid chromatographic assay for the lumefantrine quantification on dried blood spot

¹ Laboratoire de Biochimie, Hôpital St Louis, 1 avenue Claude Vellefaux, 75010 Paris, France
² Institut de Recherche pour le développement ; Mother and Child Health in the Tropics Research Unit, 08BP841 Cotonou, Benin
³ Departement des maladies infectieuses, CHU de Besançon, 25030 Besançon Cedex, France

Auteur de correspondance : pascal.houze@sls.aphp.fr

Reçu : 15 Décembre 2008
Accepté : 4 Mai 2009

Résumé

Objectif : La luméfantrine, est un nouvel antipaludéen de synthèse utilisé en association avec l'artéméter dans le traitement de l'accès palustre simple chez l'enfant. Sa mauvaise biodisponibilité impose un suivi des concentrations circulantes pour identifier les échecs thérapeutiques qui sont dus à une mauvaise absorption de ceux qui résultent d'un phénomène de résistance. Nous avons développé le dosage de la luméfantrine sur spot de sang séché, support adapté au prélèvement et au stockage des échantillons dans des conditions difficiles. Méthodes : Le dosage de la luméfantrine a été réalisé par chromatographie liquide après extraction liquide-liquide des spots par le mélange acétate d'éthyle/acide acétique. La séparation est réalisée sur colonne Xbridge avec une phase acétate d'ammonium pH 4 / acétonitrile (10/90 v/v) en mode isocratique. La détection est réalisée en UV à 335 nm, avec le tocol comme étalon interne. Résultats : La luméfantrine et l'étalon interne sont élués en respectivement 7,1 et 10,3 minutes. La méthode est linéaire entre 250 et 5000 μg/L. La limite de détection est de 85 μg/L avec une limite de quantification à 250 μg/L. La précision est satisfaisante (< 10 %), de même que l'exactitude (biais < 10 %). Les spots sont stables à +4 °C pendant 10 jours, mais une conservation à +25 °C, s'accompagne d'une baisse significative des concentrations. Les concentrations résiduelles chez des enfants traités 3 jours par la luméfantrine sont de 490 ±152 μg/L. Conclusion : Nous rapportons une méthode robuste et fiable de dosage de la luméfantrine sur spots de sang séché applicable aux études pharmacocinétiques et épidémiologiques.

Abstract

Aim: Lumefantrine is a new anti-malarial drug used in association with artemeter in the treatment of uncomplicated Plasmodium falciparum malaria in children. Poor absorption of lumefantrine needs to monitor concentrations to identify the nature of the therapeutic failure. We have developed the determination of lumefantrine on dried blood spots, which are frequently used to collect and store blood in hard conditions. Methods: Lumefantrine measurement was assayed by liquid chromatography after liquid-liquid extraction procedure using ethyl acetate/acetic acid as solvent. Separation was performed on a Xbridge column using ammonium acetate pH 4 / acetonitrile (10/90 v/v) in isocratic mode. UV detection was set at 335 nm using tocol as internal standard. Results: Lumefantrine and internal standard are eluted at 7.1 and 10.3 min, respectively. The method is linear from 250 to 5000 μg/L with a good sensitivity corresponding to 85 μg/L for limit of detection and 250 μg/L as limit of quantification. Precision (below 10%) and accuracy (below 10%) are satisfying. Lumefantrine concentrations were stable in dried blood spot during 10 days at +4 °C but a significant decrease was observed at +25 °C. Blood residual concentrations in children treated by lumefantrine during 3 days were 490 ±152 μg/L. Conclusion: We have developed a specific and accurate method to measure lumefantrine in dried blood spot available to realise pharmacologic or epidemiologic studies.