Réponses analytiques aux intoxications par substances végétales

Analytical answer to poisoning by plant material

Laboratoire d'Expertises TOXLAB, 18 rue André Del Sarte, 75018 Paris

Reçu : 10 Octobre 2000
Accepté : 30 Octobre 2000

Résumé

Environ une quarantaine de plantes (genre ou espèce) sont responsables de 95 % des décès publiés dans la littérature lors d'intoxication par les plantes. Bien que la plupart de ces toxiques soient mal connus, les molécules actives en cause peuvent être détectées par des méthodes analytiques telles que la chromatographie en phase gazeuse ou la chromatographie en phase liquide. Les méthodes analytiques publiées ne sont pas nombreuses et souvent peu sensibles ou peu spécifiques ou encore dédiées à quelques molécules ou metabolites. Nous avons développé une méthode générale pour la détection des principaux toxiques dans le sang total par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse simple ou tandem. L'extraction des molécules en liquide-liquide est conduite à pH 9,5 pour l'oléandrine, le paclitaxel et certains alcaloïdes. Les alcaloïdes bases faibles nécessitent une purification acide /base supplémentaire. L'Atractyloside est isolé par précipitation des protéines à l'acétone et lavage par une phase organique. La séparation chromatographique s'effectue en phase inverse sur colonne C18 150x2 mm i.d., 5µm d.p. au moyen de deux phases mobiles à différents pH. Un tampon formiate d'ammonium 2mM acidifié à pH 3 est utilisé pour la séparation de l'atractyloside, de l'oléandrine et du paclitaxel et certains alcaloïdes. Un tampon formiate 10 mM à pH 8,2 est utilisé pour la majorité des autres alcaloïdes. Le gradient d'élution utilise l'acétonitrile. La détection en mode positif est le mode de choix pour la majorité des alcaloïdes excepté pour l'atractyloside (mode négatif) et le paclitaxel (deux modes possibles). L'application à des cas médico-légaux est présentée ici.

Abstract

About forty plants (genera or species) are responsible for 95 % of the published fatal cases due to plant poisoning. Although many available toxins are not well known the reviewed active molecules can be identified by analytical methods like gas chromatography or liquid chromatography. The published analytical methods are not numerous and not always sensitive or specific or are dedicated just to some molecules or metabolites. We have developed a general method for the detection of main toxins in whole blood by high performance liquid chromatography - mass spectrometry or tandem mass spectrometry. Sample preparation was realized by liquid-liquid extraction at pH 9,5 for oleandrine, paclitaxel and some alkaloids. The extract of weak base alkaloids must be purified by acid/base clean up. Atractyloside was isolated by precipitation of the protein content with acetone and purified for atractyloside by washing with organic solvent. Separation of the drugs occurred under reversed phase conditions on a C18 analytical column 150x2 mm I.D. (5µm-particle size) using two different pH mobile phases. Formiate buffer 2mM acidified at pH 3,0, was used for the separation of atractyloside, oleandrine and paclitaxel and some alkaloids. Formiate buffer 10mM made basic at pH 8.2 was used for the majority of others alkaloids. A gradient elution mode was chosen using acetonitrile as the eluting solvent. Detection under positive ionisation mode was the preferred mode for all compounds except for atractyloside (negative ions) and for taxol (mixed mode available). Application to real forensic cases has been demonstrated and is presented here.