Quantification des opiacés, cocaïniques et amphétaminiques par chromatographie liquide haute performance / spectrométrie de masse en tandem aprés préparation en ligne de l'échantillon

Simultaneous determination of opiates, cocainics and amphetamines by on-line solid phase extraction coupled with liquid chromatography / tandem mass spectrometry

Laboratoire de Pharmacocinétique et de Toxicologie Cliniques, Groupe Hospitalier du Havre, BP 24, 76083 Le Havre, France

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Reçu : 15 Décembre 2007
Accepté : 25 Février 2008

Résumé

Objectif : Une méthode de dosage de substances stupéfiantes et de médicaments morphiniques par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse en tandem (CL-SM/SM), après déprotéinisation acide et extraction-purification en ligne, a été développée au sein de notre laboratoire. Méthodes : Le système utilise deux pompes (Alliance 2795 et 1525 Micro, Waters), une vanne 6 voies de commutation, une colonne de concentration-purification Oasis HLB (Waters) et une colonne analytique en phase inverse (C18 Atlantis, Waters). Les différents composés retenus sur l'Oasis HLB, sont élués à contre courant sur la colonne analytique puis séparés par chromatographie. L'acquisition des données en spectrométrie de masse s'effectue en mode MRM (multiple reaction monitoring). La durée totale d'un cycle analytique est de 16 minutes. Résultats : La méthode développée est sensible, spécifique et linéaire de 2,5 à 200 ng/mL pour les molécules non conjuguées, et de 5 à 200 ng/mL pour les métabolites glucuroconjugués. Les limites de détection s'échelonnent de 0,2 à 1,3 ng/mL pour les molécules non conjuguées, et de 1,5 à 2,5 ng/mL pour les glucuroconjugués. Conclusion : Cette méthode, simple et rapide, de préparation en ligne des échantillons couplée à la CL-SM/SM permet de quantifier simultanément, dans le plasma, sérum, sang total, ou les urines, des molécules de différentes familles : opiacés et glucuroconjugués, amphétaminiques, cocaïniques, buprénorphine et norbuprénorphine.

Abstract

Objectives: A liquid chromatographic-tandem mass spectrometric method (LC-MS/MS) for determination of opiates, cocainics and amphetamines, without time-consuming sample pre-treatment was developed. The method used acid deproteinization and on-line solid phase extraction followed by LC-MS/MS. Methods: The system consisted of two pumps for mobile phase delivery (Alliance 2795 and 1525 Micro, Waters), a six-port switching valve, a pre-column (Oasis HLB, Waters) and a reversed phase column (C18 Atlantis, Waters). The analytes were trapped on the pre-column, and after the valve was switched, the retain analytes were flushed on the analytical column for chromatographic separation. The total analysis time for a single analysis run was 16 minutes. The mass spectrometer was operated in the multiple reaction monitoring mode (MRM). Results: The method was accurate and precise across a linear dynamic range of 2,5 to 200 ng/mL, and of 5 to 200 ng/mL for glucuronides. The detection limits ranged from 0,2 to 1,3 ng/mL depending on the analyte, and from 1,5 to 2,5 ng/mL for glucuronide metabolites. Conclusion: The present method allowed on-line clean-up and enrichment, leading to improved sensitivity. This LC-MS/MS method proved to be suitable for the quantification of opiates and glucuronide metabolites, amphetamines, cocainics, buprenorphine and norbuprenorphine, in plasma, serum, whole blood or urine