Dépistage de quatre classes de stupéfiants dans les cheveux par technique ELISA à l'aide du test One-Step^TM et confirmation par chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse

Evaluation of the One-Step^TM ELISA kit forthe detection of illicit drugs in hair, followedby gas chromatography - mass spectrometry confirmation

Laboratoire ChemTox, 3, rue Grüninger - 67400 Illkirch - France

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Reçu : 2 Août 2006
Accepté : 6 Novembre 2006

Résumé

Cette étude présente une méthode immuno-enzymatique (ELISA, One-Step^TM, International Diagnostic Systems Corp.) de dépistage des stupéfiants (cannabis, amphéta-mines, opiacés et cocaïne) dans les cheveux suivie d'une technique de confirmation par GC-MS. Après décontamination et segmentation, 50 mg de cheveux sont incubés dans 1 ml de méthanol, 16 h à 40 C. Une frac-tion méthanolique (100 l) est prélevée, évaporée à sec et le résidu repris par 100 L du mélange "diluant standard et échantillons" fourni avec le kit et analysé selon les recom-mandations d'utilisation des kits. Pour la technique de confirmation (GC-MS), des procédures internes validées ont été utilisées pour chaque stupéfiant à partir de la solution méthanolique d'extraction. L'application de cette technique à 85 cas réels a permis de mettre en évidence 20 échantillons positifs pour le cannabis (THC : 0,10 à 6,50 ng/mg), 21 pour la cocaïne (0,50 à 55,20 ng/mg), 24 pour les opiacés (6-MAM : 0,20 à 11,60 ng/mg, MORP : 0,20 à 8,90 ng/mg, COD : 0,20 à 5,90 ng/mg) et 13 pour les amphétamines (AP : 0,20 et 0,27 ng/mg, MAP : 0,30 et 1,10 ng/mg, et MDMA : 0,22 à 17,80 ng/mg). Aucun faux négatif n'a été observé aux seuils de positivité retenus (0,50 ng/mg pour la cocaïne, 0,20 ng/mg pour les opiacés et les amphétamines et 0,10 ng/mg pour le cannabis). Les kits ELISA (One-Step^TM, IDS) ont montré des performances suffisantes en terme de sensibilité et de spécificité pour le dépistage des stupéfiants dans les cheveux. Une telle application pourrait se révéler intéressante dans le cadre d'un dépistage à l'embauche ou le suivi des salariés occu-pant un poste à risque, en particulier lorsque le nombre attendu d'échantillons négatifs est important car le dépista-ge ELISA est une méthode simple et rapide qui permet de traiter un grand nombre d'échantillons dans la journée.

Abstract

This work presents an immunoassay (ELISA, One-Step^TM, International Diagnostic Systems Corp.) for drugs of abuse screening (cannabis, amphetamines, opiates and cocaine) in hair followed by GC-MS confirmation. After decontamination and segmentation, 50 mg of hair sample were incubated in 1 ml of methanol during 16 hours at 40 C. A 100l aliquot was collected and evaporated to dryness. The dried extract was dissolved in 100l of the “sample and standard diluent” solution included in the kit, and proceded by the recommended instructions. GC-MS confirmation was conducted, according to our internal validated procedures, for each drug of abuse using the methanolic extract. For 85 studied cases, 20 were found positive for cannabis (THC: 0.10 to 6.50 ng/mg), 21 for cocaïne (0.50 to 55.20 ng/mg), 24 for opiates (6-MAM: 0.20 to 11.60 ng/mg, MORP: 0.20 to 8.90 ng/mg, COD: 0.20 to 5.90 ng/mg) and 13 for amphetamines (AP: 0.20 and 0.27 ng/mg, MAP: 0.30 and 1.10 ng/mg, MDMA: 0.22 to 17.80 ng/mg). No false negative results were observed according to SoHT's cut-offs (0.50 ng/mg for cocaine, 0.20 ng/mg for opiates and amphe-tamines and 0.10 for THC). One-step^TM ELISA kits appear suitable due to their sensitivi-ty and specificity for drug of abuse screening in hair. This technology could be suitable for workplace drug testing, especially when many samples have to be tested, as ELISA is an easy and high-throughput method.